考古中的“标本19MYC:13”是什么意思

发布时间: 2022-11-16 17:00:09 来源: 励志妙语 栏目: 经典文章 点击: 82

myc基因的myc癌基因与人类肿瘤myc基因定位于染色体8q24、IgH、IgK、Igλ链的基因位点分别在14q32、2P13和...

考古中的“标本19MYC:13”是什么意思

myc基因的myc癌基因与人类肿瘤

myc基因定位于染色体8q24、IgH、IgK、Igλ链的基因位点分别在14q32、2P13和 22q11,在BL细胞中往往出现C-myc基因位点与Ig基因位点之间的易位,即C-myc易位 到Ig位点的高活性转录区,从而组成一个高转活性的重排基因,启动C-myc转录,使 C-myc表达增强,促进细胞恶变,最后导致肿瘤的发生.
C-myc基因主要通过扩增和染色体易位重排的方式激活,与某些组织肿瘤的发 生、发展和演变转归有重要关系.在不同的人体肿瘤细胞系中,包括粒细胞性白血病 细胞系,视网膜母细胞瘤细胞系,某些神经母细胞病细胞系,乳腺癌细胞系及某些肺 癌细胞系,已发现C-myc或C-myc相关序列的扩增,在人结肠癌细胞系中也观察到 C-myc基因的扩增.C-myc癌基因已在成骨肉瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、脂肪肉瘤、横纹 肌肉瘤中发现扩增,当扩增达到30倍时,染色体上表现HSR和DMS,而且C-myc过量表 达与肿瘤的早期复发有关,在致瘤中,已发现ras与myc、sis与myc、myc与fos偶联激 活,协同致瘤等.
许多资料表明C-myc位点在所有受检的B细胞肿瘤中有重排,Casares等发现定位 在8号染色体上的C-myc与定位在14号染色体上的Ig重链基因有同样的14.2Kb的ecori 酶切片段,因而发生8∶14易位可能是何杰氏淋巴瘤的一个普通标志.N-myc在人神经 位母细胞瘤.视网膜母细胞瘤和小细胞肺癌中有扩增,扩增的程度与肿瘤的发病进程 有关.Schwab等报告20%的神经母细胞瘤有N-myc扩增,其中大多数是侵袭性肿瘤.Seege r等报告基因拷贝数的多少预示疾病的进程,总的来说,带有一个拷贝数的Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ、Ⅳ.期神经母细胞瘤常规治疗效果较好,带有多个拷贝的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期病人,病 情将不断加重.c-myc首先被发现与小细胞肺癌有关,30%的病例c-myc扩增,复发病人 中,myc扩增者的生存期短于没有扩增的病例,研究还发现接受化疗的肿瘤病人易引 起myc扩增.有关myc基因扩增与其它肿瘤的关系也有许多报道,认为胃癌、乳腺 癌、结肠癌、宫颈癌、何杰金氏病及头部肿瘤等都有myc基因的扩增或过度表达

myc基因的结果

1.PCR-琼脂糖凝胶电泳结果:实验设计的引物扩增Myc 3种基因,经PCR扩增,喉癌组织及正常组织细胞DNA在琼脂糖凝胶上均可见2条小于300 bp 的电泳带。第1条带为N-myc( 230bp)和L-myc(227 bp)2个DNA片段合成带,因两者只相差3 bp,故琼脂糖凝胶电泳不能将其分开而呈现1条带;第2条电泳带为C-myc基因(244 bp)。 将电泳结果拍照后的底片在激光扫描仪进行扫描,得出2条带的峰面积值。正常组织细胞的C-myc带比N-myc和L-myc合成带密度弱,比值小于1,求出正常组织细胞的C×(N+L)均值为0.6 。
C-myc扩增倍数=喉癌的C×(N+L)×0.6,考虑实验中的综合因素,定为1.5倍以上有C-myc扩增。结果显示:喉癌中有42%的C-myc扩增,正常组织细胞没有C-myc的扩增。
2.PCR-中性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果:由于中性聚丙烯酰胺凝胶电泳对DNA的分离特性,经PCR扩增后的Myc基因电泳带显示3条。第1条带为L-myc(227 bp),第2条为N-myc(230 bp),第3条为C-myc(244 bp) 。将扩增出特异性Myc基因电泳带的凝胶片,直接在激光扫描仪上进行扫描,得出3条带的峰面积值。然后用各自的峰面积值除以各自的碱基数,作为该基因的单拷贝数,将L-myc、N-myc和C-myc三者中最小的单拷贝数设定为1,比较其他2个基因的相对倍数。正常组织细胞L-myc∶N-myc∶C-myc均值为1.0∶2.2∶3.8。结果32例喉癌中47%有L-myc和C-myc的扩增,41%有N-myc扩增。C-myc的扩增率与用PCR-琼脂糖凝胶电泳检测的结果基本一致(χ=0.254,P>0.614)。 1.标本:32例喉癌组织取自我院耳鼻咽喉科住院病人,7例正常喉组织取自我科同期住院的非癌症病人,3例正常白细胞取自我院血库人全血。所有标本均经病理证实。根据喉癌组织病理分化程度不同,分为高、中、低分化癌。
2.PCR引物:5′-CCCAGCGAGACATCTGGAAGAA-3′,5′-GAGAAGCCGCTCCACATGCAGTC-3′。扩增Myc基因家族的3个基因,即C-myc(244 bp),N-myc(230 bp),L-myc(227 bp),由上海复旦大学遗传学研究所合成。
3.试剂:TaqDNA聚合酶、dNTP为Promega公司产品;蛋白酶K为Merke公司产品;硝酸银为沈阳试剂二厂产品;Marker PUC 18质粒DNA HeaⅢ酶切片段为Sigma公司产品。 1.模板DNA提取:参照参考文献[3]方法进行。
2.PCR扩增:PCR扩增总反应体积50 μl,应用模板DNA 50 ng,在DNA扩增仪操作(Perkin Elmer Cetus),循环周期为94℃1分钟,55℃1分钟,72℃2分钟,经过30个循环后,补加72℃7分钟。
3.琼脂糖凝胶电泳步骤:取PCR产物5 μl加1μl上样缓冲液(0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯氰FF,40%蔗糖水溶液)之后备用。制备2%琼脂糖凝胶倒入水平式电泳槽中。待胶凝固后加样,用1×TAE缓冲液作为电极缓冲液,溴化乙锭染色,电压低于5V/cm,时间约为2小时。电泳结束后,凝胶直接在紫外透射仪上观察结果。照像,拍片后的底片在激光扫描仪上进行扫描。
4.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤:取PCR产物5 μg加1 μl上样缓冲液之后备用。制备8%非变性聚丙烯酰胺凝胶,灌注于20 cm×20 cm×0. 1 cm垂直板电泳槽中, 待凝胶聚合后加样,用1×TBE缓冲液作电极缓冲液,室温下电泳1瓦特约14小时,待指示剂溴酚蓝移到边缘时停止电泳。将电泳后的凝胶移至方盘中进行硝酸银染色。染色过程如下:用双蒸馏水(dH2O)洗凝胶3次后浸泡于染色液(硝酸银1g,加dH2O至500 ml)中30分钟,去掉染色液,用dH2O漂洗3次凝胶,然后浸泡于显色液(NaOH15g,38%甲醛3.8 ml,加dH2O至500ml)中约10分钟,当显出棕黑色DNA区带时,用dH2O洗1次凝胶后,浸于停影液(冰醋酸25 ml,加水至500 ml)中约30分钟,然后把凝胶移至固定液(乙醇25 ml,冰醋酸2.5 ml加dH2O至500 ml)中固定。固定后的凝胶在看片灯上观察结果、拍照片,凝胶直接在激光扫描仪进行扫描。
,3者在第2外显子中有2个区域高度同源,3个基因分别表达各自独立的蛋白,它们的生理作用基本一致。研究表明,在许多肿瘤细胞中有Myc基因扩增或异常表达,但在不同的肿瘤组织和癌细胞系中,Myc基因家族的成员在扩增或表达方面有些差异。因此,深入研究Myc基因3个成员与人类肿瘤的关系非常有意义。本研究建立的PCR-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-激光扫描技术,可同时检测肿瘤组织中3种Myc基因的扩增情况,在肿瘤发生发展过程中,为进行3种基因各自作用机理的研究提供了简易的实验手段。

免疫荧光染色myc marker是怎样的

(1)空白对照:如果你做的是石蜡切片免疫组化,这个对照必须有,目的是看自发荧光,脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。
(2)阴性对照:标本直接滴加二抗,呈阴性反应。
(3)抗原对照:标本加同种动物的未免疫血清,以PBS冲洗后,在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性抗体,应呈阴性反应。
本文标题: 考古中的“标本19MYC:13”是什么意思
本文地址: http://www.lzmy123.com/jingdianwenzhang/250428.html

如果认为本文对您有所帮助请赞助本站

支付宝扫一扫赞助微信扫一扫赞助

  • 支付宝扫一扫赞助
  • 微信扫一扫赞助
  • 支付宝先领红包再赞助
    声明:凡注明"本站原创"的所有文字图片等资料,版权均属励志妙语所有,欢迎转载,但务请注明出处。
    中国传统艺术表演形式有哪些假如日本的本州岛被突然劈成两半会发生哪些连锁反应
    Top